• آخرین
  • روند
  • همه
استخراج DNA به روش فنل کلروفورم

استخراج DNA به روش فنل کلروفرم

اردیبهشت 15, 1401
پایروسیکوئنسینگ

توالی یابی به روش پایروسیکوئنسینگ(Pyrosequencing)

دی 29, 1401
توالی یابی سنگر

توالی یابی سنگر (sanger) | نسل اول تعیین توالی DNA

دی 25, 1401
توالی یابی ماکسام گیلبرت

توالی یابی ماکسام گیلبرت | روش تجزیه شیمیایی یا شکست زنجیر

بهمن 1, 1401
بررسی انواع سندرم های ژنتیکی

بررسی انواع سندرم های ژنتیکی

خرداد 17, 1401
تکنیک کریسپر

تکنیک کریسپر

خرداد 17, 1401
رومانوف

پیدا کردن اعضای خاندان رومانوف با بررسی STR های استخوان های خانواده سلطنتی

اردیبهشت 19, 1401
استخراج DNA با پروتئیناز K

استخراج DNA با پروتئیناز K

اردیبهشت 14, 1401
طراحی پرایمر

راهنمای جامع طراحی پرایمر

اردیبهشت 10, 1401
تکنیک SDS-PAGE

تکنیک SDS-PAGE

اردیبهشت 15, 1401
روز جهانی DNA

روز جهانی DNA

اردیبهشت 5, 1401
استخراج DNA به روش Salting Out

استخراج DNA به روش Salting Out

اردیبهشت 15, 1401
روز علوم آزمایشگاهی

روز علوم آزمایشگاهی؛ زاد روز حکیم اسماعیل جرجانی

فروردین 29, 1401
روز جهانی هموفیلی

روز جهانی هموفیلی

فروردین 27, 1401
کارآموزی ژنتیک مولکولی

کارآموزی ژنتیک مولکولی

تیر 2, 1401
استخراج DNA

مروری بر انواع روشهای استخراج DNA

اردیبهشت 14, 1401
دست نوشته های سرقت شده داروین

بازگشت دست نوشته های سرقت شده داروین به کمبریج پس از 22 سال

فروردین 25, 1401
  • وبسایت داروینو
  • درباره ما
  • تماس با ما
پنجشنبه, بهمن 6, 1401
  • ورود
  • ثبت نام
لوگوی وبلاگ داروینو
  • صفحه اصلی
  • بلاگ
    • همه
    • بیوانفورماتیک
    • بیوتکنولوژی
    • پزشکی و داروسازی
    • ژنتیک
    • علوم آزمایشگاهی
    • کشت سلول و بافت‌شناسی
    • میکروبیولوژی
    پایروسیکوئنسینگ

    توالی یابی به روش پایروسیکوئنسینگ(Pyrosequencing)

    توالی یابی سنگر

    توالی یابی سنگر (sanger) | نسل اول تعیین توالی DNA

    توالی یابی ماکسام گیلبرت

    توالی یابی ماکسام گیلبرت | روش تجزیه شیمیایی یا شکست زنجیر

    بررسی انواع سندرم های ژنتیکی

    بررسی انواع سندرم های ژنتیکی

    تکنیک کریسپر

    تکنیک کریسپر

    رومانوف

    پیدا کردن اعضای خاندان رومانوف با بررسی STR های استخوان های خانواده سلطنتی

    استخراج DNA با پروتئیناز K

    استخراج DNA با پروتئیناز K

    طراحی پرایمر

    راهنمای جامع طراحی پرایمر

    تکنیک SDS-PAGE

    تکنیک SDS-PAGE

    استخراج DNA به روش Salting Out

    استخراج DNA به روش Salting Out

    برچسب های پرطرفدار

    • داروینو پلاس
      • همه
      • بوم‌گردی
      • خبرهای علمی و پزشکی
      • معرفی دستگاه ها و تجهیزات آزمایشگاهی
      • معرفی سایت و نرم افزار
      • معرفی شخصیت و آزمایشگاه
      • معرفی شرکت های معتبر
      • معرفی فیلم و کتاب
      • مناسبت‌ها
      روز جهانی DNA

      روز جهانی DNA

      روز علوم آزمایشگاهی

      روز علوم آزمایشگاهی؛ زاد روز حکیم اسماعیل جرجانی

      روز جهانی هموفیلی

      روز جهانی هموفیلی

      دست نوشته های سرقت شده داروین

      بازگشت دست نوشته های سرقت شده داروین به کمبریج پس از 22 سال

      ذخایر ژنتیکی و زیستی

      ذخایر ژنتیکی و زیستی، گنجینه ی ملی ایران

      ژل داک

      دستگاه ژل داک یا مستندساز ژل و انواع آن

      نرم افزار Oligo 7

      َآنالیز و طراحی پرایمر با نرم افزار Oligo 7

      پیوند قلب خوک به انسان

      پیوند قلب خوک به انسان با استفاده از تکنیک کریسپر

      سانتریفوژ

      انواع سانتریفوژها و کاربرد آنها

      طراحی پرایمر با نرم افزار gene runner

      طراحی پرایمر با نرم افزار gene runner

      برچسب های پرطرفدار

      بدون نتیجه
      مشاهده همه نتیجه
      وبلاگ داروینو
      بدون نتیجه
      مشاهده همه نتیجه
      صفحه نخست بلاگ ژنتیک

      استخراج DNA به روش فنل کلروفرم

      توسط مدیر سایت
      اردیبهشت 15, 1401
      در بلاگ, ژنتیک
      0 0
      0
      استخراج DNA به روش فنل کلروفورم

      استخراج DNA به روش فنل کلروفرم

      استخراج DNA به روش فنل کلروفرم یکی از روش های شیمیایی استخراج DNA است که در سال 1998 به وجود آمد. انواع روشهای استخراج DNA شامل روش های فیزیکی و شیمیایی است. که استخراج DNA به روش فنل کلروفرم جز روش های شیمیایی محسوب می شود.

       

      مطالعات در رابطه با بهداشت و سلامت انسان در زمینه زیست شناسی مولکولی نیاز به استفاده از دی اکسی ریبونوکلئیک اسید (DNA)، اسید ریبونوکلئیک (RNA) و نمونه های پروتئینی دارد. استفاده موفق از برنامه های کاربردی پایین دست در دسترس از استفاده از مقدار زیاد و DNA با کیفیت بالا بهره مند خواهد شد.

      استخراج DNA یک گام کلیدی در روش های آزمایشگاهی مورد نیاز برای انجام برنامه های تحقیقاتی مولکولی است.  تکنیک‌ هایی که جهت استخراج DNA استفاده می‌ شوند، بسته به منبع نمونه، اندازه و قدمت آن، الزامات فنی، بازده زمانی، مقرون به صرفه بودن، و همچنین نمونه‌ های بیولوژیکی مورد استفاده و جمع‌ آوری و ذخیره‌ سازی آن ها متفاوتند باشد.

      خون کامل یکی از بیشترین منابع موجود برای به دست آوردن DNA ژنومی (gDNA) است و به طور گسترده در تأسیسات سراسر جهان استفاده می شود. استخراج DNA از نمونه های مختلف مایعات بدن (خون، بزاق و …)، بافت های زنده و فیکس شده، سلول ها، باکتری ها و …امکان پذیر می باشد که با وجود پروتکل های متنوعی که برای هر کدام وجود دارد، وجه اشتراک همه ی آن ها جدا کردن DNA از سایر اجزای سلولی است.

      اولین جداسازی اسید دئوکسی ریبونوکلئیک (DNA) در سال 1869 توسط فردریش میشر انجام شد. در حال حاضر این یک روش معمول در بیولوژی مولکولی یا آنالیزهای پزشکی قانونی در نظرگرفته می شود. در روش شیمیایی، کیت های مختلفی برای استخراج استفاده می شود.

      در روشهای مختلف استخراج DNA از شیوه های رایجی استفاده می شود که هدف همه آنها از هم گسیختگی مؤثر سلول‌ها، دناتوره کردن کمپلکس‌ های نوکلئوپروتئین، غیرفعال‌سازی نوکلئازها و سایر آنزیم‌ها، حذف آلاینده‌ های بیولوژیکی و شیمیایی و در نهایت رسوب DNA است. استفاده از معرف های آلی و غیر آلی و روش های سانتریفیوژ. که در نهایت، آنها به انواع روند خودکار و کیت‌های تجاری موجود تبدیل شده‌اند.

      انواع روش های استخراج DNA به حجم کل نمونه های بالینی بدست آمده بستگی دارد. با این حال، پروتئیناز K و RNase به ترتیب گروه های پروتئینی مانند لیپیدها را حذف کرده و RNA را تجزیه می کنند.

      لیز سلولی یک مرحله رایج در اکثر پروتکل های استخراج DNA است و معمولاً از طریق استفاده از مواد شوینده و آنزیم ها به دست می آید. سدیم دودسیل سولفات (SDS) و Triton™ X-100 (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) نمونه‌هایی از شوینده‌هایی هستند که برای حل کردن غشای سلولی استفاده می‌شوند.

      آنزیم ها همچنین با مواد شوینده ترکیب می شوند تا سطح سلول یا اجزای سیتوزولی را هدف قرار دهند. پروتئیناز K یک آنزیم رایج مورد استفاده در پروتکل های مختلف برای جدا کردن گلیکوپروتئین ها و غیر فعال کردن RNase ها و DNase ها است. سایر مواد دناتوره‌کننده مانند اوره، نمک‌های گوانیدینیم، و آشوب‌گردهای شیمیایی نیز برای مختل کردن سلول‌ها و غیرفعال کردن آنزیم‌های سلولی استفاده شده‌اند، اما این مواد می‌توانند بر کیفیت و عملکرد اسید نوکلئیک تأثیر بگذارند.استخراج DNA به روش فنل کلروفرم

      استخراج DNA به روش فنل کلروفرم

      یکی از بهترین و رایجترین روش های استخراج DNA به روش دستی، استخراج DNA به روش فنل کلروفرم است که توسط بارکر در سال 1998 بوجود آمد. در تکنیک استخراج DNA به روش فنل کلروفرم ابتدا بافت مورد نظر با محلول خاصی به نام بافر لیز مانند (سدیم دودسیل سولفات) SDS لیز و پروتئیناز K برای هضم آنزیمی پروتئین ها و اجزای سلولی اسید غیرنوکلئیک استفاده می شود.

      بافر لیز حاوی Tris ،EDTA ،MgCl2 ،NaCl ،SDS و سایر نمک ها است. اجزای بافر لیز نقش کمک کننده ای در تخریب غشای سلول و همچنین تخریب غشای هسته ایفا می کنند. بخش پروتئینی سلول با کمک کلروفرم و فنل که از دسته ترکیبات آلی هستند، دناتوره می شود. بافرها با EDTA مخلوط می شوند.

      در مرحله بعد، با اصافه کردن ترکیبی از فنل و کلروفرم/ایزوآمیل الکل، پروتئین ها دناتوره می شوند این روش همچنین به حذف پروتئین ها کمک می کند. پس از سانتریفیوژ، فنل در پایین لوله جمع می شود و DNA در فاز آبی قرار می گیرد در حالی که پروتئین دناتوره به صورت یک لایه نازک سفید رنگ بین هر دو لایه باقی می ماند برای حذف پروتئین های رسوب داده شده، استخراج ادامه می یابد.

      در این مرحله برای این منظور غلظت بالایی از نمک استفاده می شود. سپس دو بار شستشو با اتانول 70% DNA را رسوب می دهد، با اینکار درصد بالایی از DNA استخراج می شود. پس از جداسازی، DNA در یک بافر کمی قلیایی، معمولا در یک بافر TE یا در آب فوق خالص حل می شود.

      استخراج DNA به روش فنل کلروفرم

      فنل و کلروفرم ، DNA دو رشته ای را بازیابی می کند که برای روش های اولیه RFLP مورد نیاز است. در حالی که این روش یکی از قابل اعتمادترین و کارآمدترین روش ها است، ولی بسیار وقت گیر و زمانبر است. به استفاده از مواد شیمیایی خطرناک به همین دلیل روش خطرناکی برای استخراج DNA محسوب می شود.

      استخراج DNA به روش فنل کلروفرم جز روشهای کم هزینه استخراج DNA است و مقادیر زیادی DNA خالص نیز در این روش تولید می شود. چندین پروتکل مبتنی بر استخراج آلی DNA به طور موثر دهه‌ها پیش توسعه یافتند، اگرچه نسخه‌های بهبودیافته و کاربردی‌تری از این پروتکل‌ها نیز در سال‌های گذشته توسعه و منتشر شده‌اند.

      رسوب DNA با افزودن غلظت‌ های بالایی از نمک به محلول‌ های حاوی DNA به دست می‌آید، زیرا کاتیون‌ های نمک‌ هایی مانند استات آمونیوم با دافعه ناشی از بار منفی ستون فقرات فسفات مقابله می‌کنند. مخلوطی از DNA و نمک ها در حضور حلال هایی مانند اتانول (غلظت نهایی 70٪ – 80٪) یا ایزوپروپانول (غلظت نهایی 40٪ – 50٪) باعث رسوب اسیدهای نوکلئیک می شود.

      برخی از پروتکل ها شامل مراحل شستشو با اتانول 70 درصد برای حذف نمک اضافی از DNA هستند. در نهایت، اسیدهای نوکلئیک مجدداً در آب یا بافر TE معلق می‌شوند (10 میلی‌مولار تریس، 1 میلی‌مولار اتیلن دی‌آمین تترا استیک اسید [EDTA]).

      بافر 7-9 TE معمولاً برای ذخیره‌سازی طولانی‌مدت DNA استفاده می‌شود، زیرا از آسیب دیدن آن توسط نوکلئازها، جلوگیری می‌کند. pH، فلزات سنگین و اکسیداسیون توسط رادیکال های آزاد. تریس PH ایمن 7-8 را فراهم می کند و EDTA یون های دو ظرفیتی مورد استفاده در فعالیت نوکلئاز را کلات می کند و با آسیب اکسیداتیو ناشی از فلزات سنگین مقابله می کند.

      آموزش طراحی پرایمر

      برای دریافت خدمات مربوط به استخراج DNA از انواع نمونه ها

      از طریق لینک خدمات آزمایشگاهی می توانید اقدام نمایید

       

      پست قبلی

      کارآموزی ژنتیک مولکولی

      پست بعدی

      روز جهانی هموفیلی

      مدیر سایت

      مدیر سایت

      پست بعدی
      روز جهانی هموفیلی

      روز جهانی هموفیلی

      دیدگاهتان را بنویسید لغو پاسخ

      نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

      وبلاگ داروینو

      کلیه حقوق برای وبسایت داروینو محفوظ است.

      دسترسی سریع

      • وبسایت داروینو
      • درباره ما
      • تماس با ما

      ما را دنبال کنید

      بدون نتیجه
      مشاهده همه نتیجه
      • وبسایت داروینو
      • صفحه اصلی
      • بلاگ
        • ژنتیک
        • میکروبیولوژی
        • کشت سلول و بافت‌شناسی
        • علوم آزمایشگاهی
        • بیوتکنولوژی
      • داروینو پلاس
        • معرفی شخصیت و آزمایشگاه
        • خبرهای علمی و پزشکی
        • معرفی سایت و نرم افزار

      کلیه حقوق برای وبسایت داروینو محفوظ است.

      خوش آمدید!

      ورود به حساب کاربری خود در زیر

      رمز عبور را فراموش کرده اید؟ ثبت نام

      ایجاد حساب جدید!

      پر کردن فرم های زیر برای ثبت نام

      تمام زمینه ها مورد نیاز است. ورود

      رمز عبور خود را بازیابی کنید

      لطفا نام کاربری یا آدرس ایمیل خود را برای تنظیم مجدد رمز عبور خود وارد کنید.

      ورود