✍ روشهای لیز سلول ها و آماده سازی برای تخلیص

 جهت استخراج DNA از باکتری ها لازم است ابتدا مقادیر لازم از  آن ها را کشت بدهیم و بعد در محیط مایع به کمک سانتریفیوژ جدا کنیم و ازآن ها mass بگیریم .

برای تهیه نمونه های بافتی و گیاهی هم لازم است مقادیر مشخص از آن ها را برای استخراج آماده کنیم . و یادمان باشد برای جلوگیری از لخته شدن خونی که می خواهیم ازآن استخراج کنیم و بعدا با آن کارهای مولکولی دیگر کنیم هرگز از هپارین استفاده نکنیم و از  EDTA برای جلوگیری از لخته شدن استفاده کنیم.

• مرحله تجزیه و لیز غشای سلول

ژنوم سلول یا همان DNA در داخل غشای پلاسمایی و غشای هسته و بعضا مثلا در باکتری ها علاوه بر غشا توسط دیواره ی سلولی محافظت می شود که برای استخراج DNA باید ابتدا سلول ها شکسته شوند و لیز شوند تا DNAهمراه سایر محتویات سلولی آزاد شود. روش های مختلفی برای لیز سلول وجود دارد .

لیز سلولی به دو روش کلی فیزیکی و شیمیایی انجام می شود:

• روش فیزیکی لیز کردن سلول ها

استفاده از ذرات شیشه

شکست غشا با انجماد

شکست غشا با Boiling  یا همان شوک گرمایی

سونیکاتور یا همان امواج ماورا صوت با انرژی بالا

فشار مکانیکی همانند له کردن غشا و عبور خمیره ی سولی از یک مجرای بسیار باریک تحت فشار بسیار بالا ( French Press ) که اغلب در ابعاد صنعتی و برای شکستن سلول های باکتری ها، مخمر ها و قارچ ها که در تولید محصولات استفاده می شوند کاربرد دارد.

• روش شیمیایی لیز سلول ها

در روش های شیمیایی محلول های نمکی با ایجاد تورژسانس و دترجنت ها با حذف میان کنش های قطبی بین پروتئین ها و لیپید های غشا یا حذف لیپید ها باعث از هم گسیختگی دیواره سلولی می شوند . برای سست کردن دیواره ی سلولی در باکتری ها هم می توان از آنزیم لیزوزیم و یا EDTA که با جذب یون منیزیم که عامل اصلی استحکام  پوشش سلولیه استفاده کنیم که دیواره سلولی را هضم کنند.