کاربرد تکنیک کشت اولیه سلول در آزمایشگاه های سلولی

یکی از مهمترین آلودگی های آزمایشگاه کشت سلول آلودگی مایکوپلاسمی است. توجه و داشتن آمادگی ذهنی برای مقابله با این آلودگی آنقدر مهم است که  قبل از شروع تکنیک های مربوط به کشت سلول، باید درمورد تکنیک های آسپتیک بدانید.

روش کار/تکنیک کشت اولیه سلول

جداسازی سلول موردنظر (سلولی که می خواهیم کشت بدهیم) از بافت و آماده سازی کشت اولیه سلول، اولین و شاید حیاتی ترین مرحله برای کشت سلول ها با عملکرد های خاص است .اگر سلول های مورد نیازمان در این مرحله از بین بروند، ضرر و زیانی که دیدیم قابل جبران نیست.

کشت اولیه سلول به مرحله ای گفته می شود که سلول ها را از بافت مورد نظر جدا کردیم و این سلول ها در یک شرایط مناسب تکثیر می شوند تا زمانی که سطح پلیت را بطور کامل اشغال کنند (اگر سلول ها از نوع چسبنده بوده و رشدشان بصورت سوسپانسیون نباشد).

پس از جدا شدن از بافت این خیلی مهم است که سلول ها منفرد یا به اصطلاح single شوند. بعد از آن سلول ها را در پلیت یا ظروف چند خانه ای که به اصطلاح به هرکدام از خانه ها به اصطلاح well می گویند، قرار می دهیم.

محیط کشت مناسب که معمولا حاوی سرم جنین گاوی (FBS) است را اضافه می کنیم. قطعا این محیط کشت حاوی هورمون ها و آنزیم ها و مواد مغذی ویژه ی هر سل لاین نیز است. سپس پلیت ها را داخل انکوباتور قرار می دهیم که سلول ها روند رشد و تکثیر خودشان را شروع کنند.

همانطور که می دانید انکوباتور عمل حفظ دمای طبیعی و ثابت بدن را انجام می دهد و بعضی از انکوباتورها فشار گاز های CO2 و O2 را نیز تنظیم می کنند. بسته به نوع سل لاینی که کار می کنیم، مدت زمان فاز تاخیری، فاز رشد و توقف سلول ها باهم متفاوت است. اما به هرحال سلول ها نیازمند دفع مواد زائد و استفاده ی کافی از مواد مغذی هستند و بعد از مدتی که میزانشان از یک حدی بیشتر شود در این موارد دچار مشکل می شوند.

تا رسیدن به این مرحله معمولا در روز ۳ و ۶، ما باید محیط کشت قبلی را کامل خارج کنیم و محیط جدید را وارد پلیت سلول ها کنیم. پس از پوشیده شدن صفحه ی پلیت نیاز است که سلول ها را از یک پلیت به دو پلیت تقسیم کنیم‌. روال کار با اکثر سلول ها همین نسبت ۱ به ۲ است اما گاهی پیش می آید که این نسبت ۱ به ۴ هم شود. پس اگر دارید در ادامه ی کار نفر قبلی که کشت اولیه سلول را انجام داده کار می کنید حتما این نسبت را از آن فرد بپرسید تا در محاسباتتان دچار مشکل نشوید!

برای یادگیری روش های کشت سلول و سایر تکنیک های مورد نیاز برای آزمایشگاه کشت سلول

از طریق لینک دوره های آموزشی تخصصی آزمایشگاه می توانید اقدام نمایید

دستورالعمل جدا کردن سلول ها از کف پلیت و انتقال آن ها

1-محیط کشت سلول ها را خالی می کنیم و آن ها را با حجم کمی PBS شستشو می دهیم.

2-سپس PBS را خالی می کنیم و برای جداشدن سلول ها از کف پلیت یا فلاسک آنزیم تریپسین به همراه EDTA در حدی که کف را کاملا بپوشاند اضافه می کنیم و برای ۲-۵ دقیقه می گذاریم در انکوباتور که انکوبه شود.

3-بعد از آن با مشاهده ی ظرف زیر میکروسکوپ، مطمئن می شویم که سلول ها از کف جداشدن و حالا محیط کشت حاوی FBS را به سلول ها اضافه می کنیم تا اثر تریپسین را خنثی کنیم.

4-بعد از چند بار پیپتاژ سلول های جدا شده را داخل یک فالکون می ریزیم و داخل سانتریفیوژ قرار می دهیم.

5-محیط روی لوله ها را تخلیه کرده و محیط جدید به آن اضافه می کنیم.

پیش از پاساژ دادن سلول ها معمولا لازم است که با استفاده از رنگ تریپان بلو و شمارش سلول های رنگی، میزان زنده مانی سلول ها را بسنجیم.

تجربه آزمایشگاهی: پروتکل های زیادی برای یک تکنیک واحد وجود دارد که شما با توجه به نوع سلولی که کار می کنید و حتی شرایط و تجربه ی افرادی که در آزمایشگاه محل فعالیت شما کار می کنند می توانید از یکی از این پروتکل ها استفاده کنید. میزان آنزیم و هورمون افزوده و استفاده از محیط های مغذی، همه بستگی به نوع کار شما دارد. مشورت با افراد با سابقه را جدی بگیرید که گاهی از اجرای پروتکل ها نیز بیشتر به شما کمک می کند!

برای دریافت خدمات آزمایشگاه کشت سلول و انجام انواع کشت سلولی

از طریق لینک خدمات آزمایشگاهی می توانید اقدام نمایید