✍ پروتکل/دستورالعمل کشت مغز استخوان

 جمع آوری نمونه در کشت نمونه مغز استخوان

جمع آوری نمونه های مغز استخوان مشابه خون محیطی است. به این ترتیب که آسپیره های مغز استخوان باید در سرنگ یا لوله خلاء استریل که حاوی هپارین سدیم بدون نگهدارنده است، جمع آوری و در دمای اتاق منتقل شوند.

 بهترین نمونه برای آزمایشگاه سیتوژنتیک چه نمونه ای است؟

چند میلی لیتر اول نمونه بیشترین میزان سلول را دارد، پس بنابراین بهترین نمونه برای آزمایشگاه سیتوژنتیک محسوب می شود. در قسمت پایانی نمونه مغز استخوان را رقیق می کنند بنابراین تعداد سلول های فعال و تقسیم شونده کاهش پیدا می کند.

موفقیت کشت مغز استخوان به سلول های فعال و در حال تقسیم نمونه بستگی دارد . نمونه بعد از دریافت بدون تا̋خیر باید بررسی شده تا از مرگ سلولی جلوگیری شود.

انواع محیط های مورد استفاده برای کشت مغز استخوان

محیط های کشت پایه (Basal media) مورد استفاده برای مغز استخوان:

TC 199, Ham s  F10, Eagle s MEM: McCoy s  ۵A Iscove s,  RPMI  ۱۶۴۰   هستند که:

McCoy s  ۵A ,  RPMI 1640 ، محیط های بهتری هستند. ظروف کشت بهتر است سطح وسیعتری داشته باشند. به دلیل اینکه سلولهای مغز استخوان با رشد سریع باید در معرض مواد غذایی بیشتری قرار بگیرند، پس باید از فلاسک کشت ۲۵  سانتی متر مربع ، لوله لیتون و یا ظروف یونیورسال استفاده نموده و لوله لیتون بسیار مناسب می باشد.

دستورالعمل های/روش های کشت مغز استخوان

شامل ۲ روش است:

۱-روش کشت معمولی

۲- روش کشت با قدرت تفکیک بالا (High resolution)

دستورالعمل/روش کشت معمولی شامل ۳ نوع کشت است:

۱-کشت مستقیم (direct)

۲-کشت کوتاه مدت  (معمولا ۲۴، ۴۸ و یا ۷۲ ساعته)

۳-کلسمید در طول شب (overnight culture,ONC)

دستورالعمل/پروتکل کشت مستقیم  (direct)

۱۰۰µl کلسمید به لوله کشت حاوی محیط کشت کامل و نمونه اضافه کرده و در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد، به مدت ۱-۵/. ساعت انکوبه نموده، و سپس مرحله هاروست کنید.

نکته: این نوع کشت برای موارد لنفوم ولوسمی M2) ALM  و  M3) مناسب نیست.

دستورالعمل/کشت کوتاه مدت، ۲۴ ساعته، ۴۸ ساعته، ۷۲ ساعته:

در این مرحله کاری که باید انجام دهیم این است که ابتدا لوله های کشت ۲۴، ۴۸، ۷۲ ساعته، که در دمای ۳۷ درجه انکوبه کردیم ۱۰۰µl کلسمید اضافه کرده و پس از ۵/. ساعت مرحله هاروست نمائید.

دستورالعمل/روش کار کشت کلسمید در طول شب (ONC)

بیست میکرولیتر ۲۰µl کلسمید به لوله کشت در ساعت ۶-۵ بعد از ظهر اضافه کرده و اول صبح روز بعد مرحله هاروست کنید.

کشت موارد خاص

کشت برای تحریک تقسیم رده های سلولی B

درموارد لوسمی CLL و یا لنفوم از نوع رده سلولی B بایداز میتوژن های تحریک کننده تقسیم رده سلولی B استفاده نمود. البته توجه کنید که میتوژن PWM علاوه بر سلول های نوع  B،محرک تقسیم سلول های نوع Tنیز می باشد.

کشت برای تحریک رده های سلولی: T

درموارد لوسمی CLL و یا لنفوم ازنوع رده سلولی T، از میتوژن فیتوهماگلوتینین(PHA) می شود استفاده کرد.

کاریوتایپ – نمونه مغز استخوان – پروتکل/ روش کشت باقدرت تفکیک بالا (HR)