✍ پروتکل/دستورالعمل تست های مهم خانواده انتروباکتریاسه

INdole Test:

این تست در محیط اندول که حاوی اسید آمینه تریپتوفان است، انجام می شود. برخی از باکتری ها دارای آنزیم تریپتوفاناز بوده و می توانند تریپتوفان موجود در محیط را شکسته و اندول تولید کنند. اندول تولید شده را می توان توسط چندین معرف مختلف شناسایی کرد ولی واکنش اصلی شیمیایی در همه آنها یکسان است. معرف کواکس امروزه بیش از سایر معرف ها مورد استفاده قرار می گیرد، با افزودن این معرف به محیط حاوی اندول، حلقه قرمز رنگی در سطح محیط ظاهر می شود.

Methyl red:

برخی از باکتری ها هنگامی که گلوکز را به عنوان تنها منبع کربن در دسترس داشته باشند، مقادیر زیادی اسید آلی نظیر اسید لاکتیک، اسید فرمیک و اسید سوکسنیک تولید می کنند. این مسیر متابولیکی اصطلاحا تخمیر اسیدی مخلوط (Mixed acid fermentation) نامیده می شود. تولید مقادیر زیاد اسید و کاهش اسیدیته محیط را می توان با افزودن معرف متیل رد شناسایی کرد. زیرا این معرف در pH معادل ۴ تا ۵ قرمز و در pH معادل ۶ تا ۷ زرد رنگ است. تولید رنگ قرمز پس از افزودن معرف متیل رد رد نشانه مثبت بودن آزمایش ( تخمیر اسیدی مخلوط) و پیدایش رنگ زد نشانه منفی بودن آزمایش (تخمیر بوتیلین گلیکول) می باشد.

Voges Preskauer:

برخی باکتری ها هنگامی که گلوکز را به عنوان تنها منبع کربن در دسترس داشته باشند، مقادیر زیادی مواد خنثی به صورت بوتان دیول، استوئین و مقدار کمی اسید تولید می کنند. استوئین ماده حد واسطی است که در حضور پتاس اکسید شده و به دی استیل تبدیل می شود و آلفا نفتول بعنوان کاتالیزور عمل نموده و تولید رنگ قرمز می نماید.

Citrate Test:

توانایی تعدادی از باکتری ها در مصرف سیترات سدیم به عنوان تنها منبع کربن و انرژی و نمک آمونیوم به عنوان تنها منبع نیتروژن در افتراق باکتری های خانواده انتروباکتریاسه بکار می رود. در این تست از محیط سیمون سیترات استفاده می شود. این محیط به علت حضور معرف برومو تیمول بلو سبز رنگ است و در صورت مصرف سیترات و مثبت بودن تست به رنگ آبی تغییر رنگ می یابد.

Nitrate Test:

باکتری های هوازی بی هوازی اختیاری(انتروباکتریاسه) می توانند در غیاب اکسیژن از مواد آلی به عنوان گیرنده نهایی الکترون استفاده نمایند. این باکتری ها دارای آنزیم نیترات ردوکتاز می باشند، که می تواند نیترات را به نیتریت احیا کند.
اگر نیترات به نیتریت احیا شده باشد، پس از اضافه کردن معرف اسید سولفانیلیک باعث ایجاد اسید نیتریک و تشکیل نمک دیازونیوم شده و این نمک با معرف آلفا نفنیل آمین تشکیل رنگ قرمز یا بنفش محلول در آب را می دهد.
پدیدار نشدن رنگ قرمز ممکن است به یکی از ۳ دلیل زیر مرتبط باشد:
۱. تمام نیترات موجود در محیط به نیتریت و سپس به آمونیاک تبدیل شده که در این صورت نیتریت در محیط وجود ندارد که با اسید سولفانیلیک ترکیب شود.
۲. تمامی نیترات موجود در محیط به گاز ازت تبدیل شده که در این حالت نیز نیتریت در محیط کشت وجود ندارد.
۳. نیترات احیا نشده است.

برای آگاهی از آنچه روی داده است مقدار کمی از گرد روی (Zn) به محیط کشت اضافه کنید در صورت احیا نشدن نیترات و وجود آن در محیط توسط پودر روی احیا شده و به نیتریت احیا می گردد و رنگ قرمز پدیدار می شود، ولی عدم پیدایش رنگ قرمز پس از اضافه کردن پودر روی، دلیل مصرف شدن همه نیترات بوده و آزمایش مثبت است.

Decarboxylase Test:

توانایی باکتری ها در دکربوکسیله کردن اسید های آمینه مثل؛ لیزین دکربوکسیلاز، اورنیتین دکربوکسیلاز و آرژنین دکربوکسیلاز یکی از روش های تشخیصی انتروباکتریاسه می باشد. آنزیم های دکربوکسیلاز، اسید های آمینه را در محیط کشت دکربوکسیله نموده و آمین تولید شده باعث واکنش قلیایی می شوند

Urease Test:

باکتری هایی که دارای آنزیک اوره آز می باشند، بر روی اوره موجود در محیط کشت اثر کرده و آن را به آمونیاک، دی اکسید کربن و آب تبدیل می کنند، آمونیاک تولید شده باعث قلیایی شدن محیط می گردد. بنابراین با استفاده از معرف pH (فنل رد) حضور آمونیاک بررسی می شود. فنل رد در ۶.۸= PH نارنجی کم رنگ و در pH=8.1 به رنگ ارغوانی دیده می شود.

 باکتری های خانواده انتروباکتریاسه

تست های مهم گروه باکتریایی انتروباکتریاسه – بخش اول

تست های مهم گروه باکتریایی انتروباکتریاسه – بخش دوم

آزمایش TSI برای شناسایی اعضای خانواده انتروباکتریاسه