✍ آنالیز داده ها و گراف های HRM

گراف تکثیر:

در آنالیز HRM اهمیت تکرار پذیری تکثیر نسبت به بازده واکنش بیشتر است (در مقایسه با qPCR). برای مثال، آنالیز HRM، زمانی که تکثیر قطعه ی مورد نظر دیرتر از انتظار انجام شود نیز قابل اجرا می باشد. به عنوان مثال، زمانی که محدودیت طراحی پرایمر داریم یا میزان الگو پایین است، به شرطی که برای تمام نمونه ها یکسان و سازگار باشد، کنترل NTC منفی باشد و تکثیر اختصاصی انجام شده باشد.

 داده های خام منحنی ذوب:

جمع آوری داده ها در طول آنالیز HRM شامل یک بازه زمانی خوانش فلورسانس قبل از ذوب است. این واریانس برای تجزیه و تحلیل داده مشکل می باشد، حتی اگر ژنوتیپ های مختلفی با اختلاف زیاد در نمونه وجود داشته باشد. برای آنالیر این داده ها باید مناطق قبل و بعد از ذوب را برای چینش صحیح داده ها انتخاب کرد. مشخص کردن دو طرف ناحیه ی ذوب باید طوری باشد که نواحی قبل و بعد از ذوب شدگی به درستی انتخاب نشود، ممکن است که نیاز باشد آنالیز HRM را دوباره تکرار کنید.

 گراف نرمالیزه شده:

در منحنی داده های خام پراکندگی فلورسنس دیده می شود، اما در گراف نرمالیزه شده تغییرات رنج دمایی ناحیه ذوب مشاهده می شود، که می توان ژنوتیپ های مختلف را مشخص کرد، اما هنوز هموزیگوت بودن نمونه ها به سختی قابل تفکیک می باشد.

گراف تمایز:

این گراف از طریق تفریق داده های فلورسنس نرمال شده از میزان حرارت هر کدام از نمونه ها نسبت به نمونه ی Baseline ( ژنوتیپ تعریف شده ای که از قبل به دستگاه داده شده است و هر ژنوتیپی می تواند باشد اما معمولا یک هموزیگوت انتخاب می شود ) به دست می آید. این گراف در واقع داده های نرمال شده را تجسم کرده و نام گذاری هر یک از ژنوتیپ ها را به طور اتوماتیک انجام می دهد، اگر چه بهتر است که تفاوت های اعلام شده در زمان آنالیز داده ها چک شود.

تکنیک آنالیز منحنی ذوب DNA با وضوح بالا (HRM)

بررسی داده های به دست آمده از منحنی ذوب با وضوح بالا (HRM)

مشکلات رایج در منحنی ذوب با دمای بالا (HRM)  و اصلاح روش

رنگ ها و دستگاه های مورد استفاده در HRM