✍ کاربرد مهم تست اکسیداز/oxidase  در آزمایشگاه تشخیصی

از میان باکتری های بیماریزای گرم منفی نایسریا و پسودوموناس از نظر اکسیداز مثبت(oxidase+) می باشند، در حالیکه خانواده انتروباکتریاسه  اکسیداز منفی بوده و با انجام این تست ساده قابل افتراق هستند. آنزیم های اکسیداز نقش بسیار مهمی را در سیستم انتقال الکترون در تنفس هوازی ایفا می کنند. در این سیستم سیتوکروم اکسیداز اکسیژن با به عنوان گیرنده الکترون مورد استفاده قرار می دهد.

توانایی باکتری ها در تولید آنزیم سیتوکروم اکسیداز را می توان با انجام تست اکسیداز(Oxidase Test) مشخص نمود. آنزیم سیتوکروم اکسیداز قادر به اکسید کردن سوبسترای  تترامتیل-پار-فنیلن دی آمین- دی هیدروکلراید و تشکیل محصول رنگی ایندوفنل (Indophenol) می باشد. اگر مقدار کمی از ارگانیسم تولید کننده این آنزیم را بر روی یک تکه کاغذ آغشته به سوبسترا بمالیم، رنگ ارغوانی تیره ای ایجاد می شود. این سوبسترا در حضور آنزیم اکسیداز و اکسیژن آزاد به عنوان دهنده الکترون عمل کرده و در اثر اکسید شدن به ترکیب سیاه رنگی تبدیل می شود.

پروتکل/روش انجام آزمایش oxidase

در این تست محلول ۱% تترامتیل پارافنیلن دی آمین دی هیدروکلراید مورد استفاده قرار می گیرد. معمولا می توان جهت مصرف روزانه ۵۰ میلی گرم پودر را در ظروف درب دار کوچک پلاستیکی ریخته و ۵ میلی لیتر آب مقطر به آن اضافه نموده و هر روز یک ویال را مورد استفاده قرار داد.

یک کاغذ صافی تمیز را در سطح یک پلیت استریل پلاستیکی قرار داده و آن را با چند قطره از معرف تازه مرطوب نمایید. مقدار کمی از کلنی جوان( کمتر از ۲۴ ساعت) را با استفاده از یک اپلیکاتور چوبی تمیز برداشته و بر روی کاغذ صافی مرطوب شده قرار دهید.

از نظر تغییر رنگ کلونی ها به رنگ آبی و بنفش در مدت ۱۰ تا ۲۰ ثانیه بررسی کنید، دقت کنید که زمان بررسی رنگ اهمیت زیادی دارد. ارگانیسم هایی که دارای آنزیم اکسیداز هستند(گونه های جنس نایسریا) رنگ کلونی را در مدت ۱۰ ثانیه به رنگ بنفش تغییر می دهند.

ارگانیسم هایی که فاقد این آنزیم هستند(مانند اشرشیا کولی) در مدت ۱۰ ثانیه هیچ تغییر رنگی را ایجاد نمی نمایند. این واکنش در اثر اکسیداسیون در معرض هوا مثبت می شود، بنابراین اگر جواب آزمایش بعد از ۲۰ تا ۳۰ ثانیه خوانده شود نتیجه مثبت کاذب داده و ارزش تشخیصی ندارد.

نکات مهم در حین انجام آزمایش

1. توجه داشته باشید در تست اکسیداز تغییر رنگ سواب ۲۰ تا ۳۰ ثانیه بعد از زمان افزودن معرف ارزش تشخیصی ندارد.
2. استفاده از میله فلزی (نیکل-کروم) در نتیجه آزمایش اکسیداز تداخل ایجاد کرده و نتیجه مثبت کاذب می دهد.
3. سواپ ها و اپلیکاتورهای مصرف شده را بلافاصله در ظروف حاوی مواد ضدعفونی کننده قرار دهید.

• Coagulase Test | آزمایش کواگولاز و DNase
• Urease Test (UBT) |  تست اوره آز
• Catalase Test |  تست کاتالاز

داروینو پلتفرم آموزشی و خدماتی آزمایشگاهی

اگه در مورد این موضوع نیاز داری آموزش ببینی و خودتو ارتقا بدی حتما یه سر به دوره های آموزشی وبسایت داروینو بزن و هدفتو پیدا کن …