✍ تکنیک هایی که از ایجاد آلودگی در آزمایشگاه کشت سلول جلوگیری می کنند.

با توجه به جدول می ­توان مشاهده کرد که کاهش کیفیت  تکنیک های اسپتیک -Aseptic و استریلاسیون و همینطور افزایش آلودگی­های محیطی، هردو در ایجاد یک آلودگی سیستمیک نقش دارند. تا زمانی که پیک­ ها یا به اصطلاح، نویز­های این دو عامل با هم تلاقی پیدا نکردند، آلودگی سیستمیک تشخیص داده نمی­ شود، اما با برخورد این دو پیک باهم آلودگی شروع شده و اگر برطرف نشود می تواند بسیار گسترده شود. آلودگی کوچکی در یک پلیت می تواند منجر به تعطیلی آزمایشگاه کشت سلول، بخش و یا حتی به طور کلی دپارتمان مربوطه شود. پس بخاطر داشته باشید اگر کاری را انجام دادید که برخلاف تکنیک­های آسپتیک بود یا احتمال ایجاد آلودگی داشت، حتما به کارشناس آزمایشگاه کشت سلول اطلاع دهید تا از گسترده تر شدن آن جلوگیری شود.

یکی از مهم­ترین آلودگی _­های رایج در کشت سلول، آلودگی با مایکوپلاسماست. این آلودگی با میکروسکوپ نوری قابل تشخیص نیست و معمولا جز علائمی که نشان از کاهش یا اختلال در رشد در محیط کشت سلول ها دارد، قابل شناسایی نیست و ما مجبوریم که خودمان تست­های تشخیصی را انجام دهیم. از جمله تست­های تشخیصی برای مایکوپلاسما می­ شود به PCR, ELISA , رنگ­آمیزی فلوئورسنت و کشت در محیط اختصاصی اشاره کرد. رنگ­آمیزی فلورسنت DNA با Hoechst یکی از ساده ترین و قابل اطمینان­ترین روش­هاست و آلودگی­های مايکوپلاسما را به شکل ذره­های ریز و یا رشته های فیبری رنگی روی سیتوپلاسم نشان م ی­دهد. هسته ­های سلول­های کشت شده نیز با استفاده از این روش، رنگ­آمیزی می­ شوند و به عنوان کنترل مثبت برای روش رنگ ­آمیزی عمل می­کنند.

روش تشخیصی PCR نیز مزایای قابل توجهی دارد، از جمله حساسیت بالا و زمان تست کوتاهتر از مزایای تکنیک PCR است ، هر چند ممکن است با شناسایی مايکوپلاسمای غیرفعال شده، جواب مثبت کاذب ایجاد کند.

روش معتبر دیگر، کشت میکروبیولوژیکی است. که یک روش بسیار حساس است و به طور گسترده در روش­های کنترل کیفیت و اعتبار سنجی مورد استفاده قرار می­ گیرد. با این حال، باید این روش را فقط درصورت داشتن امکانات تخلیص مناسب و تجربه ­کافی در میکروب­شناسی انجام دهیم، چون این میکروارگانیسم­ها بسیار گمراه­ کننده هستند، لازم است که مایکوپلاسمای زنده را به عنوان کنترل مثبت  کشت دهیم. از آنجایی که آلودگی در آزمایشگاه کشت سلولی و نتیجه­ی کار نقش خیلی مهمی دارد، از اولین تکنیک­ های لازم تکنیک­های مرتبط با شناسایی تشخیص و رفع این آلودگی­ها باید استفاده کرد.

جدول کتاب فرشنی از کتاب های مرجع برای کشت سلول