✍ فعالیت اختصاصی آنزیم ها راه کاری مناسب برای شناسایی سلول ها

علت مشاهده تیره سلولی غیرطبیعی در حین پاساژ سلولی تیره مورد نظر : در حین پاساژ سلول ها اگر به جز تیره ی سلولی مورد نظرمان تیره ی دیگری هم مشاهده شد، یک آلودگی به اسم cross  contamination  به حساب می آید، بنابراین باید مطمئن شویم که در حین پاساژ سلولی تیره ی سلولی دیگری مشاهده نشود.

Cross Contamination:  فرآیندی است که توسط آن، میکروارگانیسم های دیگر به طور ناخواسته از یک ماده به ماده دیگر منتقل می شوند و آن را آلوده می کنند که دارای اثر بسیار مضر می باشد.

 بررسی فعالیت آنزیم ها:

بعضی از سلول ها فعالیت آنزیمی اختصاصی دارند. مثلا سلول های کبدی آنزیم آرژیناز و سلول های اندوتلیال آنزیم فسفاتاز قلیایی دارند. البته لازم است این نکته توجه داشت که در خیلی از این سلول ها بعد از کشت در محیط آزمایشگاهی و پاساژ سلولی متعدد کاهش شدید فعالیت آنزیمی را شاهد هستیم که احتمالا به خاطر تغییر محیط رشد و عدم دریافت سیگنال های لازم است. سلول های بافت کبدی چند روز پس از کشت فعالیت آرژینازی خودشان را از دست می دهند و چرخه ی اوره در آنها متوقف می شود، در سلول های اندوتلیال هم کاهش فعالیت فسفاتاز قلیایی اتفاق می افتد. با این حال استثناء هم وجود دارد و بعضی تیره های سلولی همیشه فعالیت آنزیمی اختصاصیشان را حفظ می کنند. مثلا تیره سلولی سرطان کبد موش صحرایی از آن جمله است که فعالیت تیروزین آمینوترانسفرازی اختصاصی خودش را همیشه و تحت هر پاساژ سلولی حفظ می کند. البته باید توجه کنیم که بعضی از این آنزیم ها بطور ذاتی ترشح می شوند و ترشح بعضی از آنها هم قابل القاء است. گروه دوم برای دست ورزی ما روی تکنیک تشخیص سلول ها با توجه به فعالیت آنزیمی آنها مناسب تر است. یعنی اینکه می شود با اضافه کردن مکمل هایی به محیط کشت آنها، سلول ها را وادار به ترشح آنزیمی کرد و بعد تیره ی آنها را تشخیص داد. به عنوان مثال در صورت استفاده از گلوتامات بجای گلوتامین در محیط کشت سلولی، فعالیت آنزیم گلوتامیل سنتتاز که از آنزیم های اختصاصی سلول های استروگلیای مغز است چندین برابر افزایش پیدا می کند. به طور کلی برای القاء و یا افزایش فعالیت آنزیمی سلول ها از هورمون های گلوکوکورتیکوئیدی همانند دگزامتازون یا هورمون های پلی پپتیدی ازجمله انسولین و گلوکاگون استفاده می شود. علاوه بر این با کاهش غلظت محصولات آنزیم مورد نظر و یا تغییر غلظت سوبسترای آنزیم می شود توان تولید آنزیم های ذکر شده را القا کرد.

تکنیک های تشخیص هویت سلول ها

تکنیک تشخیص هویت سلول ها با اندازه گیری پروتئاز

تکنیک تشخیص هویت سلول ها-زایموگرافی