✍ پروتکل تکنیک فریز کردن سلول ها در آزمایشگاه های سلولی

نکته ای که باید در کار با سلول بدانیم این است که اکثرا نیاز است بخشی از سلول ها را در آن پاساژ خاص نگهداری کنید و بقیه ی سلول ها را به پاساژ بعدی ببرید. از راه های نگهداری سلول ها می توانیم به فریز کردن آنها اشاره کنیم. طبیعتا تکنیک فریز می تواند به سلول ها چه از لحاظ متابولیکی و چه شکل ظاهریشان آسیب وارد کند پس باید تکنیکی را در فریز انتخاب کرد که کمترین آسیب را به سلول ها برساند. فریز سلول ها با استفاده از محلول فریز حاوی DMSO و به تدریج( یعنی کاهش دمای ناگهانی انجام نشود) می تواند آسیب را کمتر (نه صفر) کند .

دی متیل سولفواکساید (DMSO) یک عامل نفوذ پذیر است که می تواند به غشای سلول نفوذ کند و بین لیپید های دولایه ی غشا قرار بگیرد. به این ترتیب ویسکوزیته و سرعت انتشار و بطور کلی خواص غشا سلولی تغییر می کند و آماده ی انجماد می شود.

دستورالعمل/روش فریز کردن

۱-برای فریز باید بعد از تعیین زنده مانی سلول ها تصمیم گیری کنیم که چه مقداری از سلول ها را قرار است فریز و نگهداری کنیم.

۲-سپس با توجه به تعداد سلول ها از تعدادی کرایوویال استفاده می کنیم.حتما روی کرایوویال اسم سلول، تعداد و شماره ی پاساژ و اسم فردی که دارد فریز را انجام می دهد و همینطور تاریخ فریز را می نویسیم.

۳-در یک لوله ی جدا، مقدار لازم از FBS ی که دارای DMSO 10% است را آماده می کنیم.

۴-تقریبا برای هر ۲×۱۰ به توان ۶ سلول،  ۰/۵ ml از محلول FBS وDMSO  اضافه می کنیم و بعد از پیپتاژ خیلی سریع به کرایوویال ها تقسیم می کنیم.

۵-بعد از آن، وقت انتقال کرایوویال ها به فضای سرد برای انجماد است. اما باید به تدریج انجماد انجام شود. پس اول کرایو ویال ها را به فریزر ۲۰- درجه برای دو ساعت و بعد از آن به فریزر ۸۰- درجه  برای ۶ تا ۱۲ ساعت منتقل می کنیم.

۶-در مرحله ی نهایی کرایو ویال های حاوی سلول ها را به تانک نیتروژن(۱۹۶- درجه) منتقل می کنیم و تا زمانی که به سلول ها نیاز داریم و باید آن ها را دفریز یا ذوب کنیم داخل تانک نیتروژن از آن ها نگهداری می کنیم.

تکنیک ذوب یا دِفریز سلول ها (Cell Melting Technique)